ELISA实验是测定蛋白质浓度相对最准确的实验方法，尤其是大分子蛋白，测定浓度时候ELISA法是最接近样本真实浓度的，该实验又对实验室要求相对较低，用到的仪器比较简单，方便操作，这也是ELISA方法经久不衰的主要原因。
ELISA实验操作并不复杂，但是影响实验结果的因素却很多，为了获得更理想的实验结果，同时为了节约试剂，避免不必要的浪费，首先在选择ELISA试剂盒时候，应选择灵敏度高，特异性好，稳定性好，批间差小，操作储存方便的优良试剂。不同厂家，或者批次的试剂不能混用。
ELISA实验中常见的问题如下：
一：标曲弱，整体OD值低
这种情况出现的原因和解决方案如下：
二：标曲正常，样本OD值偏低
三：背景过高
四：低灵敏度   整个板子无显色
建议客户用1ul检测B 加入50ul底物，看是否有颜色变化，如果没有颜色变化证明是检测B显色剂失效。
有的客户把洗涤液当稀释液会出现白板，有的客户把检测A和检测B弄混淆加错了先后顺序会出现白板。
不同产品试剂相互混淆会出现白板， 酶被污染或者失活
实验过程PH错误
  建议实验前一定要把试剂盒样本平衡至室温，标准品稀释时确保充分溶解，及时更换枪头，实验操作中带手套，口罩，谨防飞沫等污染。
  因此样本采集时候或者血清分离时要注意避免溶血，脂血，细菌污染，如果有溶血，浑浊或者絮状物时候，应自然放置1-2小时，或者37度水浴放置10分钟使血液充分凝固收缩，适当加强离心速度，延长离心时间例如3000r/min 离心15分钟，使血细胞和纤维蛋白充分沉淀，血细胞和血清分离后取上清，尽量使标本中非特异性物质所致的假阳性率降到最低。 加样： 加标本时候交叉污染会导致假阳性，例如，盛放标本的试管周围常有血痂，易脱落，应远离酶标板。
加样太快： 加样太快难以保证加样的准确性和均一性，如果加在孔壁上部的非包被区，也容易导致非特异性结合造成的假阳性。 如果试剂盒酶标板质量差，结合不均匀导致包被不均匀造成花板，酶标板的原材料塑料板，具有较强的吸附蛋白质的性能，因此被广泛应用于ELISA包被， 但是它既可以媳妇特异性蛋白质，也可以吸附非特异性蛋白质，所以需要在洗涤时把这些非特异性物质洗涤下来，通过洗涤来清除这些非特异性吸附的干扰物。 因此洗涤有时候决定着实验的成败。 有的厂家底物不稳定，使用之前就易变蓝，如果实验前没有仔细检查，极有可能会出现花板现象。 边缘效应指的是外周孔显色较中心孔更深，原因是96孔板，周边孔与中心孔表面热力学梯度不同，工作环境温度不均衡，建议：使用水浴，或者在把反应溶液加入板孔时，将板和溶液都加热到温浴温度（例如 37度）就可以避免边缘效应，且可提高测定重复性。 操作过程中不及时更换枪头，人为改变实验步骤，延长或缩短反应时间，随意增减洗涤次数或者洗涤量，或者配置洗涤工作液时候太随意，导致浓度过高或者过低。
客观因素，例如视线不清晰，或者手抖导致交叉污染。